1、開始運行儀器

打開熒光定量PCR儀底座開關(guān)，再打開定量PCR儀檢測器開關(guān)。實驗前先讓系統(tǒng)預(yù)熱30分鐘，打開電腦，啟動iQ5軟件。

2、放置樣品

   將PCR反應(yīng)體系加入到0.2ml的薄壁管或96孔板中，蓋上管蓋。注意，必須帶一次性塑料手套，不要讓手指接觸到反應(yīng)管表面。將反應(yīng)管按順序放入儀器的加熱孔中。

3、設(shè)置程序，運行實驗定量PCR軟件操作基本步驟為：

a.設(shè)置熱循環(huán)程序文件（Protocolfile）
b.設(shè)置反應(yīng)板文件（PlateSetupfile）
c.點擊“Run”鍵,運行程序
d.數(shù)據(jù)分析

4、熒光定量PCR儀測量結(jié)果分析

①PCR反應(yīng)結(jié)束后，軟件會自動計算標(biāo)準(zhǔn)曲線和Ct值等。

②如需進行表達量分析、等位基因分析等，在軟件窗口選擇相應(yīng)分析功能。

③點擊右上方的“Report”鍵，還可輸出結(jié)果報告單

5、關(guān)閉運行儀器

     實驗結(jié)束后關(guān)閉iQ5軟件、熒光定量檢測器及擴增系統(tǒng)電源，關(guān)閉電腦，取出反應(yīng)管。